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購買國外細(xì)胞株應(yīng)該注意的事項(xiàng)

[2010/11/24]

 

由于現(xiàn)在國內(nèi)的細(xì)胞庫資料不是很充足，而且比較零散，包括建株時的技術(shù)層面不一，沒有比較嚴(yán)格統(tǒng)一的操作規(guī)范，所以在遇到比較重要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目時，一般都比較傾向于購買國外的細(xì)胞株，但購買國外細(xì)胞株需要考慮的因素有如下幾點(diǎn)：

1、細(xì)胞株的生物等級，由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品，所以從國外購貨比較麻煩。

2、在購買國外細(xì)胞株時，需交待國外加比較多的干冰（一般在13公斤以上，采用比較密封的泡沫盒加套紙箱。

3、報關(guān)時盡量提供比較充足的證明材料，以免擔(dān)擱時間而導(dǎo)致干冰揮發(fā)完細(xì)胞株死亡，甚至于被退回給發(fā)貨人。

4、如果通過國外細(xì)胞株在國內(nèi)的代理商購買的話，合同中需注明以下一些內(nèi)容：

a.明確的到貨時間，這個時間需注明的是工作日，還是普通日。

b.采用什么樣的運(yùn)輸方法？

c.如果屬于技術(shù)外的因素而細(xì)胞株無法培養(yǎng)活，供方需負(fù)什么樣的責(zé)任？

d.細(xì)胞株的詳細(xì)資料，以及細(xì)胞株的代數(shù)，其中，ATCC的細(xì)胞株一般都在幾十代,這個需要與國外確認(rèn)，IST-Banca可與他們的代理商聯(lián)系索取詳細(xì)資料！

e.需在合同中注明原裝進(jìn)口，避免相關(guān)公司魚龍渾雜，從國外購買回一株細(xì)胞株，經(jīng)過培養(yǎng)傳代后，同時供應(yīng)給幾個人；一般國外進(jìn)口的細(xì)胞株都會有原裝的凍存管，而且每一支凍存管上都會有批號，而且每次的批號都不一樣。

f.在決定購買細(xì)胞株之前，必須仔細(xì)閱讀他們的培養(yǎng)信息，所謂“細(xì)胞株未到，培養(yǎng)基先行一步”。

g.在接到細(xì)胞株后，最好要求供應(yīng)公司的人員現(xiàn)場參與，從而用于確認(rèn)責(zé)任。

h.在培養(yǎng)前，請確認(rèn)您的二氧化碳培養(yǎng)箱二氧化碳濃度的準(zhǔn)確性，國外的細(xì)胞株建議用進(jìn)口的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，比如：orange，corning, falcon品牌的培養(yǎng)瓶。

i.詢問你的代理商或者經(jīng)銷商，接到細(xì)胞株后是否需要離心置換出DMSO，因?yàn)橛行┘?xì)胞廠家建議不要離心，他們會認(rèn)為離心而導(dǎo)致的碎片比DMSO產(chǎn)生毒性的害處更大，如果可以離心，轉(zhuǎn)速不要過高，一般都在1000轉(zhuǎn)以下，此處需要注意，因?yàn)橛械墓緯眠@一點(diǎn)來拒絕索賠！

j.培養(yǎng)基的服務(wù)，仔細(xì)與供應(yīng)商確認(rèn)培養(yǎng)基的品牌及份量，以免供應(yīng)商以些理由來推翻你索賠的理由。

k.在細(xì)胞株復(fù)蘇時，一定要先想好步驟再做，一步一步來做，避免導(dǎo)致操作中的污染，復(fù)蘇是一個非常重要的步驟，往往容易導(dǎo)致污染，然后為污染所導(dǎo)致的雜質(zhì)而傷透腦筋。

細(xì)胞運(yùn)輸中，還要注意細(xì)胞株的反復(fù)凍融情況，有的供應(yīng)商在供應(yīng)細(xì)胞株或者培養(yǎng)基時，特別是需要低溫保存的培養(yǎng)基時，通常會出現(xiàn)運(yùn)輸溫度與儲存溫度的差別，而導(dǎo)致培養(yǎng)基或細(xì)胞株融掉后又放進(jìn)低溫冰箱進(jìn)行凍存，然后再快遞給我們，特別是血清類制品，如果在接到培養(yǎng)基并解凍后，沉淀和絮狀物較多時，那就要懷疑是否是這種情況！

對于所買回來的細(xì)胞簽別，除了顯微鏡下的形態(tài)學(xué)觀察，還有就是特異性實(shí)驗(yàn)，這也是比較重要的！細(xì)胞株有些時候復(fù)蘇后剛培養(yǎng)的時候，老師們發(fā)現(xiàn)從形態(tài)上判斷似乎不是自己所需要的細(xì)胞株，于是我就建議他做細(xì)胞屬性的特異性實(shí)驗(yàn)，ATCC的技術(shù)資料最后面附有細(xì)胞株的代數(shù)，以及細(xì)胞株經(jīng)過了哪些檢測，細(xì)胞株特異性實(shí)驗(yàn)的方法，從而用以確認(rèn)真正是自己所需要的細(xì)胞株！凍存的細(xì)胞株，特別是從國外進(jìn)口的細(xì)胞株，應(yīng)該立即復(fù)蘇，盡量不要再凍存，反復(fù)凍融會導(dǎo)致細(xì)胞株復(fù)蘇后的活性低！第一次接種培養(yǎng)時，應(yīng)以進(jìn)口的25平方厘米的培養(yǎng)瓶為佳，現(xiàn)在市面上的主要有orange,cornig,BD(Falcon),其中orange價格比較公道5-6元/個，BD（Falcon)最貴10元左右每個，BD的產(chǎn)品一般用于醫(yī)院生殖中心實(shí)驗(yàn)室人工受精卵的一到三代培養(yǎng)！ATCC的細(xì)胞株培養(yǎng)基分為完全培養(yǎng)基（原代培養(yǎng)），次培養(yǎng)基（傳代培養(yǎng)基），請大家要注意！

如果細(xì)胞運(yùn)來后，應(yīng)該馬上進(jìn)行復(fù)蘇，復(fù)蘇時，迅速投入37攝氏度水浴中并不斷振搖，使之迅速融化，離心應(yīng)在1000轉(zhuǎn)/分以下，如果太高速會使本來脆弱的細(xì)胞產(chǎn)生較多的碎片，培養(yǎng)過程中，甚至?xí)驗(yàn)樗槠霈F(xiàn)黑點(diǎn)(一般都是800r/min,5min)，棄上清液，以去除二甲基亞砜。加入先前配好的培養(yǎng)基，并在50ml培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。