怀化焕毕租售有限公司

高效液相色譜法測定大黃蟲丸中芍藥苷的含量

[2012/2/10]

　　【摘要】目的建立高效液相色譜法測定大黃蟲丸中芍藥苷含量的方法。方法采用HypersilODS2柱(4.6mm×250mm×5μm);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);柱溫30℃;檢測波長230nm。結(jié)果芍藥苷線性范圍0.12～1.08μg，平均回收率=98.78%，RSD=1.35%。結(jié)論該方法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于該制劑中白芍的質(zhì)量控制。

　　【關(guān)鍵詞】大黃蟲丸芍藥苷高效液相色譜法

　　大黃蟲丸收載于《中國藥典》2005年版Ⅰ部[1]，主要由熟大黃、土鱉蟲、水蛭、桃仁、白芍、黃芩等12味中藥組成，功效活血化淤，通經(jīng)消癥。用于瘀血內(nèi)停而致腹部腫塊、肌膚甲錯、經(jīng)閉不行等，臨床療效確切。但原藥為蜜丸，劑型落后，本實驗擬對其進(jìn)行二次開發(fā)，原方中藥味較多，《中國藥典》含量測定只對方中熟大黃中大黃素進(jìn)行了含量測定，對用量較大的白芍未進(jìn)行定量，實驗采用高效液相色譜法建立了該藥中芍藥苷的含量測定方法，為進(jìn)一步開發(fā)該制劑打下基礎(chǔ)。

　　1器材

　　1.1儀器

　　AngilentHP1100高效液相色譜儀;G1314A紫外檢測器;KQ-500DE型超聲儀。

　　1.2藥品大黃蟲丸(廣東陽江制藥廠有限公司，批號051104，051218，060320);陰性樣品(自制)。

　　1.3試劑及材料

　　芍藥苷對照品批號(中國藥品生物制品檢定所，批號0715-200211);高效液相使用乙腈為色譜純，水為高純水;其余試劑均為分析純。

　　2方法

　　2.1含量測定色譜條件色譜柱為AngilentHypersilODS2柱(4.6mm×250mm，5μm);流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);柱溫30℃;流速1.0ml/min;檢測波長230nm;進(jìn)樣量10μl。

　　2.2對照品溶液的制備精密稱芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.6mg的溶液，作為對照品貯備液。

　　2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取對照品貯備液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。各精密吸取10μl注入液相色譜儀中，測定，測得峰面積，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍為0.12～1.08μg，回歸方程Y=941.6X 6.2919，r=0.9999。

　　2.4供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50ml，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz，40℃)處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，通過氧化鋁-活性炭柱(中性氧化鋁3g，濕法裝柱，上覆層析用活性炭1g，甲醇預(yù)洗)，用甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，水浴濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品液。HPLC圖譜見圖1。

　　2.5陰性實驗按處方比例，制得缺白芍制劑，按供試品項下方法制備陰性樣品，進(jìn)行高效液相測定，證明陰性無干擾。

　　2.6精密度實驗取芍藥苷對照品溶液(60.8μg/ml)，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積分別為580.27545，580.94385，583.23654，582.19873，583.49573，RSD=0.24%,表明儀器精密度良好。

　　2.7穩(wěn)定性實驗取供試品溶液(批號051104)，每隔2h進(jìn)樣測定1次，共進(jìn)樣6次，測得芍藥苷的峰面積值分別為345.85455，348.25948，351.16549，347.02654，349.98742，346.14215。RSD=0.62%，表明樣品溶液在10h內(nèi)測定穩(wěn)定。

　　2.8重復(fù)性實驗取樣品(批號051104)5份，按供試品制備項下分別提取，精制，測定，芍藥苷含量分別為1.8026，1.8374，1.8244，1.8149，1.7886(mg/g)，RSD=1.04%，表明實驗重復(fù)性良好。

　　2.9加樣回收率實驗取樣品(批號051104)5份，分別加入芍藥苷對照品適量，按樣品制備項下方法制備。結(jié)果見表1。表1芍藥苷加樣回收率實驗結(jié)果(略)

　　2.10樣品測定分別取3批樣品，按供試品溶液制備項下制備供試品，分別進(jìn)樣，測定即得。測定結(jié)果見表2。表2不同批次樣品中芍藥苷的含量測定結(jié)果(略)

　　《中國藥典》2005年版Ⅰ部中白芍藥材中芍藥苷含量不得少于1.6%，推算得知大黃蟲丸中芍藥苷含量應(yīng)不得少于1.44mg/g，因此以上3批樣品含量均合格，二次開發(fā)制劑中芍藥苷的含量應(yīng)以此為依據(jù)。

　　3討論

　　原方中藥味較多，直接使用溶劑提取進(jìn)行液相測定干擾較大，因此實驗考察了供試品制備方法中提取溶劑(甲醇，稀乙醇)、提取方法(回流、超聲)、提取時間(20，40，60min)、過柱(上樣量、洗脫量)的條件，結(jié)果以正文所述方法最好，樣品能夠達(dá)到較好的分離。

　　試比較了3種流動相[2]：①甲醇-水-冰醋酸(49∶50∶1);②乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85);③乙腈-水(13∶87)，結(jié)果以流動相②分離效果最好，故選擇流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)。

　　該含量測定方法簡便，快速，重現(xiàn)性好，既可以為進(jìn)一步開發(fā)大黃蟲丸奠定基礎(chǔ)，亦適合推廣應(yīng)用于含較多藥味的中成藥中白芍的檢測。