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色譜常見使用問題的解答

[2012/3/23]

　　一、問：用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?

　　答：關于漂移問題：

　　1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

　　2、流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等

　　3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡

　　關于快速變化問題?

　　1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩(wěn)定

　　2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

　　3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

　　二、問：色質聯用中毛細柱的選擇應注意什么問題?

　　答：1、柱效要高

　　2、熱穩(wěn)定性好

　　3、化學惰性強

　　具體選擇應注意?

　　1、柱極性。根據分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析

　　2、柱子內徑。內徑大小決定柱容量

　　3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄

　　4、柱長度。柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長，因此要根據樣品考慮柱子長

　　度

　　5、外涂層(柱體)的選擇

　　6、另外還有儀器型號、分析對象等因素

　　三、問：液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?

　　答：1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

　　2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子

　　四、問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩(wěn)定性好壞?

　　答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好。

　　2、理論塔板數n，熱穩(wěn)定性好的柱子經受高溫后，理論塔板數應基本保持恒定

　　3、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現為保留指數I值沒有大的變化。

　　4、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加.

　　5、柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質量好的毛細管柱子高溫后，去活層

　　不應該變化，表現在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

　　五、問：為什么進樣器內的玻璃襯套會對色譜行為造成影響?

　　答：進樣器內的玻璃襯套主要有下列作用：?

　　1、提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱。

　　2、玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。

　　3、易于拆換清洗 ，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會慢慢分解，使基

　　流增加，噪聲增大，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。

　　4、可根據需要選擇管壁厚度及內徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個進樣加熱塊。從以上幾個方面

　　可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。

　　六、問：毛細管色譜分流進樣時，非線性分流的主要原因是什么?

　　答：1、進樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級分流。

　　2、進樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進樣器內表面上。

　　3、在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。

　　4、系統(tǒng)的進樣墊，柱接頭等地方漏氣。

　　七、問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

　　答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量

　　2、樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子

　　3、樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器

　　4、檢測器衰減太多：調整衰減即可。

　　5、檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間參數

　　6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。

　　7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。

　　8、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。

　　9、流動相流量不合適：調整流速即可。

　　10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

　　八、問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在?如何解決?

　　答：原因可能有：

　　1、泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理;

　　2、比例閥失效，更換比例閥即可。

　　3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

　　4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法;

　　5、系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可。

　　6、梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

　　九、問：做PGS/MS分析時，如何防止焦油狀污染物進入毛細柱?

　　答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時，常有焦油狀物質產生。為防止這種焦油狀物質進入毛細柱造成污染

　　而使柱性能下降，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱，通過控制預柱溫度而使焦油狀物質滯留在預柱內

　　，預注可置于GC氣化室內，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積，當然，預柱填料需經常更換。

　　十、問：我最近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現，為什么?

　　答：這是因為被分析物可能具有形成氫健的能力。盡管過去幾年來，填料的制造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料

　　表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相

　　對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺(TEA)，將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號柱

　　子上的相對保留時間具有較好的重現性。

　　十一、問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么?

　　答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的

　　起因。

　　1、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查;

　　2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。

　　3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性

　　)。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查;

　　4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓

　　還高，請與廠商聯系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne

　　7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。

　　十二、問：高溫毛細柱的使用壽命一般為多長?

　　答：毛細柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態(tài)，進樣量等，如果在其

　　使用溫度范圍內，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。

　　十三、問：如毛細管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢復?是否可通過老化來解決?

　　答：根據柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴重，污染物沸點不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可

　　超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時間(8—30小時)，如果污染較嚴重，或通過老化仍不能使柱性能恢復，那就必須采用

　　溶劑清洗，通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷，二氯甲烷等)通過色譜柱。當然，清洗溶劑用的越多，對柱性能的損壞越大，

　　清洗完后，在通載氣老化一定時間，如果柱性能恢復，便可繼續(xù)使用。必須指出：只有交聯柱才能清洗，對于非交聯柱，清洗

　　柱會徹底失效，因為固定液被洗掉了，至于清洗用溶劑的選擇，可參考說明書。

　　十四、問：BPX70毛細管柱是否可用于GC/MS分析?

　　答：完全可以，BPX70為極性柱，使用溫度范圍寬(25—260℃)，程序升溫可達290℃，流失低，適合于分析脂肪酸甲酯的各種位

　　置和幾何異構體，藥物異構體，碳水化合物等。因BPX70為交聯住，故用于GC/MS很穩(wěn)定，污染后可清洗再生。