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使用超高效合相色譜系統(tǒng)測(cè)定雌二醇(Estradiol)色譜純度

[2012/6/14]

　　目前，美國(guó)藥典(USP)檢測(cè)雌二醇(estradiol)色譜純度的方法使用4.6 x 250 mm的硅膠柱和含有2,2,4-三甲基戊烷、正丁基氯、甲醇45:4:1的流動(dòng)相，流速2 mL/min。由于許多實(shí)驗(yàn)室都想限制脂肪烴和氯化物溶劑的使用，所以必須對(duì)替代性的色譜方法，如超臨界流體色譜(SFC)進(jìn)行評(píng)估。沃特世ACQUITY UPC2系統(tǒng)被用于開發(fā)測(cè)定雌二醇色譜純度的方法。

　　Ultra Performance Convergence Chromatography™(UPC2™)得到的結(jié)果直接和由目前的美國(guó)藥典檢測(cè)雌二醇雜質(zhì)的方法對(duì)比。兩種方法檢測(cè)的結(jié)果相似，與美國(guó)藥典使用的正相HPLC方法相比，UPC2方法檢測(cè)雌二醇雜質(zhì)的靈敏度更高。此外，使用UPC2時(shí)，樣品的運(yùn)行時(shí)間大大縮短，每次分析的總成本也顯著降低(基于溶劑用量和廢液處理成本計(jì)算)。

　　使用UPC2方法測(cè)定雌二醇的色譜純度，其速度是目前正相HPLC方法的3倍，而單次分析的成本降低100多倍。

　　解決方案

　　使用現(xiàn)行美國(guó)藥典方法制備和分析雌二醇，如圖1所示。HPLC分析的結(jié)果同ACQUITY UPC2系統(tǒng)分析的結(jié)果(使用相同的樣品制備方法)進(jìn)行對(duì)比。

　　UPC2方法的條件如下：

　　色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，2.1 x 150 mm，1.7 微米

　　流動(dòng)相： A=CO2 B=1:1甲醇/異丙醇

　　背壓： 130 bar/1880 psi

　　柱溫： 45 °C

　　檢測(cè)： UV /PDA，280 nm

　　兩種測(cè)試方法得到的結(jié)果對(duì)比見表1。正相HPLC方法和UPC2均檢出至少5種含量小于0.1%(按面積計(jì)算)雜質(zhì)。兩種方法在0.01%范圍內(nèi)峰的信噪比約為3:1，UPC2結(jié)果得到的值稍高。UPC2方法測(cè)得的最大雜質(zhì)(以面積計(jì)約0.05%)的信噪比為16:1，正相HPLC方法測(cè)得的為9:1。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰地表明，ACQUITY UPC2系統(tǒng)可成功地用于分析雌二醇中的微量雜質(zhì)。UPC2方法的運(yùn)行時(shí)間明顯短于正相HPLC方法所用的時(shí)間(20min對(duì)比60min)，從而提高了實(shí)驗(yàn)室的生產(chǎn)率。對(duì)每次運(yùn)行的成本分析表明，正相HPLC的溶劑成本5.89美元，而使用UPC2，每次運(yùn)行的成本僅為0.05美元。正相HPLC方法所

　　產(chǎn)生需要處理的混合氯化物廢液為108Ml2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產(chǎn)生的需處理

　　廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過(guò)實(shí)驗(yàn)室排氣管排出。使用UPC2方法，廢液處理成本降低了150倍之多。2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產(chǎn)生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過(guò)實(shí)驗(yàn)室排氣管排出。使用UPC2方法，廢液處理成本降低了150倍之多。