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中性粒細胞吞噬功能的測定操作方法

[2012/11/6]

　　中性粒細胞(Poly morpho nuclearleukocyte，PMN )的功能包括粘附、移動、吞噬殺菌等，是機體天然免疫力的重要組成部分。

　　試劑及材料

　　1.白色葡萄球菌

　　2.肉湯培養(yǎng)基

　　3.鹼性美藍液

　　操作方法

　　1.菌液的制備將白色葡萄球菌接種于中，放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右;置水浴中加熱100℃10min殺死細菌，用無菌生理鹽水稀釋成6×108細菌/ml備用;

　　2.用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl，立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi)，輕輕攪動混勻，再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預(yù)溫)，在37℃溫箱中作用30min，其間每隔10min搖勻一次;

　　3.作用完畢，取1小滴混合液置于潔凈無油污的載玻片一端，推成薄片。待干后，用甲醇固定4～5min，鹼性美藍液染2～3min，置油鏡下觀察。隨機計數(shù)100個中性粒細胞，分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細胞數(shù)，對有吞噬作用的白細胞，應(yīng)同時記錄所吞噬的細菌數(shù);

　　結(jié)果分析

　　吞噬細胞%=即100個中性粒細胞中吞噬有細菌的細胞數(shù);

　　吞噬指數(shù)=將100個中性粒細胞所吞噬的細菌總數(shù)除以100，得到每個白細胞吞噬細菌的平均數(shù)，即為吞噬指數(shù)。