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基因組DNA的分離純化提取方法講解

[2019/7/31]

基因組DNA的分離純化提取方法講解

DNA的提取是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)技術(shù),提取的DNA的純度及結(jié)構(gòu)完整性是進(jìn)行基因工程各項(xiàng)研究所必需的條件。歸納基因組DNA提取的各個(gè)環(huán)節(jié)．

同時(shí)對(duì)DNA提取過程中的常見問題、原因及應(yīng)對(duì)策略作簡(jiǎn)要的分析綜述。


實(shí)驗(yàn)的一般步驟為

1．破碎細(xì)胞.

2．DNA的提取

3．DNA的純化

第一步中破碎細(xì)胞常用有三種方法

①機(jī)械法：主要通過機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法。

本實(shí)驗(yàn)常用的器械有玻璃勻漿器。將剪碎的組織置于管中，再

套入研桿來回研磨，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎。勻漿器的研

缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。此法

細(xì)胞破碎程度較高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。②化學(xué)法：有些化學(xué)藥品可以改變細(xì)胞膜的通透性從而使內(nèi)合物

有選擇地滲透出來。例如某些有機(jī)溶劑（如苯、甲苯）、抗生

素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等。

實(shí)驗(yàn)中常用GA緩沖液，GA緩沖液中含有表面活性劑可以打開

細(xì)胞的磷脂雙分子層，增加通透性。且GA緩沖液是低滲溶液，細(xì)

胞易吸水漲破，達(dá)到更好打開細(xì)胞的效果。

特點(diǎn)：作用比較溫和

存在的問題：作用時(shí)間長(zhǎng)，效率低；化學(xué)試劑毒性較強(qiáng)，同

時(shí)對(duì)產(chǎn)物也有毒害作用，進(jìn)一步分離時(shí)需要用透析等方法除去這

些試劑。

③酶解法：利用各種水解酶，破碎細(xì)胞將細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來。

常用蛋白酶K和十二烷基硫酸鈉(SDS)消化破碎細(xì)胞。

此種方法的特點(diǎn)是：適用范圍廣；作用條件溫和；內(nèi)含物成分不

易受到破壞。但其成本高，限制了大規(guī)模的利用且耗時(shí)較長(zhǎng)。

以上三種破碎細(xì)胞的方法可結(jié)合使用，使細(xì)胞破碎完全，利于接

下來的步驟。

第二步中DNA的提取有兩種方法：

①沉淀法

實(shí)驗(yàn)常采用異丙醇或無水乙醇快速提取DNA

一般經(jīng)典酒精標(biāo)本DNA提取方法都會(huì)加入蛋白酶K，且在56℃條件下消化3h以上，以達(dá)到組織中蛋白質(zhì)的完全消化。

得到的提取液經(jīng)RNA酶處理，酚、氯仿和異戊醇反復(fù)抽提，即可得較純的DNA產(chǎn)物。


好了，以上就是小編為大家分享的有關(guān)“基因組DNA的分離純化提取方法”的一些信息，希望對(duì)各位科研人員有所幫助。


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