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生物醫(yī)學(xué)顯微攝影操作步驟

[2011/10/13]

　　生物顯微攝影(Microphotography)是利用攝影裝置來拍攝顯微鏡視野中所觀察到的物像。在生物醫(yī)學(xué)方面，主要用于對(duì)正常細(xì)胞或病變細(xì)胞的顯微形態(tài)學(xué)研究記錄。具體操作步驟如下：

　　一 準(zhǔn)備步驟

　　拍攝前作以下預(yù)備工作，調(diào)整顯微鏡至最佳狀態(tài)。

　　1.光路合軸 使光軸與光束處于同一軸線上。

　　2.柯勒氏照明 使觀察的視野獲礙均勻而又充分的照明;防止雜散光對(duì)照相系統(tǒng)產(chǎn)生影響。

　　3.物鏡與目鏡合理組合 依標(biāo)本的不同和顯微攝影要求，物鏡與目鏡的組合有一定規(guī)范。

　　4.調(diào)整視場(chǎng)光闌和孔徑光闌 使兩者與所用物鏡的數(shù)值孔徑相等，所得的分辨力最高;視場(chǎng)光闌一旦調(diào)好，不要再動(dòng)，而孔徑光闌可隨物鏡數(shù)值孔徑的更換，做相應(yīng)的調(diào)整。

　　二 拍攝步驟

　　拍攝是顯微攝影系列操作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在鏡檢觀察中，發(fā)現(xiàn)需要攝下的影像應(yīng)即時(shí)拍照。

　　1.開啟相機(jī)后蓋，安裝膠卷于照相機(jī)內(nèi)。

　　2.打開顯微鏡照明裝置的電源開關(guān)，將亮度調(diào)至適當(dāng)。

　　3.依個(gè)人的視力，調(diào)整攝影目鏡調(diào)焦環(huán)至“井”字線清晰。

　　4.放一片需要拍攝的標(biāo)本載玻片于載物臺(tái)上。在低倍鏡下選好要拍攝的核型或細(xì)胞結(jié)構(gòu)，再轉(zhuǎn)換到油鏡下，聚焦標(biāo)本細(xì)節(jié)，準(zhǔn)備拍照。

　　5.按下曝光按鈕，曝光按鈕亮表示曝光開始進(jìn)行，熄滅表示曝光完畢。

　　6.拍攝記錄

　　三 膠片沖印步驟

　　感光膠片在拍攝完畢后，需盡快在暗室中沖洗和曬印，其方法和普通照像相似。

　　1. 把膠片裝入顯影罐中(切勿粘在一起)先用清水沖洗，排除氣泡.然后再把水倒掉，這有利于顯影液的快速均一作用。

　　2. 從頂部罐口注入預(yù)先配好的約250ml D-72式顯影液。20℃顯影4～12分鐘。

　　3. 顯影中輕輕搖影罐，使膠片表面充分受顯影液作用，顯影完畢，迅速倒出顯影液。

　　4. 立即注入250ml預(yù)先配好的SB—I式停影液，停顯時(shí)間為10秒，倒出停影液，隨之加入250ml的F一5式酸性堅(jiān)膜定影液，20℃定影15分鐘。取出膠片流水沖洗30分鐘以上。

　　5. 將膠片掛起，用脫脂棉輕輕吸掉膠片表面過多的積水，晾干。

　　6. 晾干后用放大機(jī)的膠片夾子夾住膠片，藥膜面朝下，聚焦取景，然后在紅燈條件下，用壓紙板壓住所需號(hào)放大像紙，藥膜面向上.進(jìn)行曝光(適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間要經(jīng)試驗(yàn)后決定)。

　　7. 曝光后的像紙，浸入D-72顯影液中，然后用竹鑷子不時(shí)地夾住像紙翻動(dòng)，直到顯影適度為止。

　　8. 顯影合適后立即移到SB-I式停影液中，漂洗10～20秒，再浸入定影液中處理15分鐘，取出在流水中沖洗60分鐘左右。

　　9. 水洗后，放在電熱上光機(jī)上烘干;裁邊，裝入有說明的紙袋內(nèi)保存。