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紫外分光光度法檢測保健食品中大豆異黃酮的含量

[2012/2/11]

　　【摘要】目的：以大豆苷元為標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度法檢測三種市售保健品中大豆異黃酮總濃度.方法：保健品用甲醇 水(80 20,V/V)在70℃超聲提取40min，以大豆中的活性成分大豆苷元為標(biāo)準(zhǔn)品，檢測波長254nm，計(jì)算樣品含量.結(jié)果：回歸方程為Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994,線性范圍：0.8～6.4mg/L,平均回收率為99.32%,RSD=0.044%.結(jié)論：本方法適用于檢測保健食品中大豆異黃酮含量.

　　【關(guān)鍵詞】保健食品;大豆異黃酮;大豆苷元;紫外分光光度

　　0引言

　　大豆異黃酮含量測定的方法很多[1]，主要有高效液相色譜法(HPLC)，高效液相色譜質(zhì)譜法(HPLCMS)、氣相色譜法(GC)和毛細(xì)管電泳法.我們采用的紫外分光光度法與其它方法相比，簡便快捷，且對儀器設(shè)備要求不高，目前用此方法測定保健食品中大豆異黃酮含量少見報(bào)道.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　TU9100型紫外分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司);TU1800紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)，KQ100型超聲機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司).大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所1502200101).市售保健品3種：安睡美(華博眾生物科技有限公司);天雌(四川旭化華制藥有限公司);欣靚(華北制藥康欣有限公司).甲醇(分析純).氯仿(分析純).

　　1.2方法

　　1.2.1保健品中大豆異黃酮提取與分離取保健品4粒，精密稱質(zhì)量，置100mL圓底燒瓶中，加800mL/L甲醇70mL超聲提取40min，趁熱抽濾,甲醇提取液在35℃減壓蒸去甲醇，然后在45℃減壓蒸去水，再加入20mL甲醇溶解作為供試品溶液備用.

　　1.2.2大豆異黃酮苷元的檢驗(yàn)

　　1.2.2.1薄層色譜用硅膠GF254薄層板，以氯仿無水甲醇(10∶0.5)為展開劑，用標(biāo)準(zhǔn)品和樣品點(diǎn)樣(無水甲醇溶解)，在254nm紫外燈下檢測，見圖1.

　　1.2.2.2紫外分光光度檢測用TU1800紫外可見分光光度計(jì)在波段200～400nm條件下分別檢測無水甲醇、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品.

　　2結(jié)果

　　2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[2]精確稱取大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品2.0mg，置于25mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻線，搖勻.分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻線，搖勻.以甲醇為空白，在254nm的波長處測定A值.以濃度為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.138X-0.0056，R2=0.9994，線性范圍0.8～6.4mg/L.

　　2.2含量測定精確量取供試品溶液0.01mL，用無水甲醇稀釋1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度計(jì)在波長254nm處測定A值3次，取平均值.測定結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品含量(表1).表1三種樣品的含量(略)

　　2.3精密度實(shí)驗(yàn)同一供試品溶液(天雌)0.01mL，用無水甲醇稀釋1000倍到10mL定容，用TU9100型紫外分光光度計(jì)在波長254nm處連續(xù)測定6次A值，分別為0.102,0.099,0.100,0.100,0.099,0.096，結(jié)果RSD=0.133%，說明儀器精密度較好.

　　2.4加樣回收率實(shí)驗(yàn)[3]向已知含量的樣品(天雌)中加入不同量的大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品，按2.2的方法進(jìn)行含量測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2.回收率的平均值為99.32%，RSD=0.044%，表明方法的回收率較好.表2回收率測定結(jié)果(略)

　　3討論

　　由于配置的供測品使用甲醇為溶劑，大豆異黃酮放置過程中可能有分解，所以進(jìn)行了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).將同一供試品溶液(天雌)每隔30min測定1次A值，6次測定結(jié)果分別為0.102,0.099,0.097,0.095,0.096,0.092,RSD=0.25%，表明供試品溶液在3h內(nèi)穩(wěn)定.

　　4結(jié)論

　　紫外分光光度法測定保健食品中大豆異黃酮含量與其它方法比較簡便快捷，對儀器設(shè)備要求不高,重現(xiàn)性好,適用于保健食品中大豆異黃酮含量的測定.