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紫外分光光度法測定板藍(lán)根滴眼液的含量

[2012/2/11]

　　【關(guān)鍵詞】紫外分光

　　【摘要】目的測定板藍(lán)根滴眼液的含量。方法紫外分光光度法，檢測波長290nm。結(jié)果靛玉紅吸收度與濃度呈良好的線性關(guān)系。r=0.9994，回收率為100.1%，管RSD<0.832。結(jié)論本法簡便，準(zhǔn)確。

　　關(guān)鍵詞 靛玉紅板藍(lán)根 滴眼液 紫外分光光度法

　　【Abstract】ObjectiveTodeterminethecontentofBanlangenDiyanye.MethodsTheDingyuhongweredeterminedbyspectrophotometryatwavelenth290nm.ResultsTheaveragerecoveryrateofwas100.1%(RSD<0.83，r=0.9994).ConclusionThemethodwassimpleandaccurate.

　　KeywordsUVBanlangenDiyanyeUV

　　板藍(lán)根作為清熱解毒藥在臨床上應(yīng)用頻率甚高，其中以板藍(lán)根沖劑、板藍(lán)根注射劑為我們所熟知。多用于呼吸道感染、流行性腮腺炎、流行性乙型腦炎、流行性感冒、傳染性肝炎、紅眼病等。本文以板藍(lán)根為原藥材，利用其抗菌、抗病毒以及清熱解毒之功效，與有潤滑作用的“人工淚液”相結(jié)合，研制了用于眼部消炎、防止眼部干澀的板藍(lán)根滴眼液。

　　通過板藍(lán)根的化學(xué)成分及藥理活性研究表明，靛玉紅是其有效成分之一，具有廣譜抗菌作用以及抗病毒、抗內(nèi)毒素作用，同時(shí)，靛玉紅還能夠抗癌，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。為保證臨床使用的板藍(lán)根制劑的質(zhì)量，通常選用靛玉紅、靛藍(lán)作為板藍(lán)根的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。我們選擇靛玉紅作為標(biāo)準(zhǔn)品，測定板藍(lán)根的含量。

　　1儀器與藥品

　　紫外分光光度計(jì)(貝克曼公司)，靛玉紅(中國藥品生物制品檢定所)，板藍(lán)根滴眼液(自制)，其它試劑均為分析純。

　　2方法及結(jié)果

　　2.1檢測波長的選擇通過對(duì)靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品的紫外掃描，從圖1可見靛玉紅在290nm處有顯著吸收峰，板藍(lán)根提取物在290nm附近有吸收。因此選定290nm為檢測波長。

　　圖1靛玉紅的紫外掃描圖譜(略)

　　2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精確稱取靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品10mg，置100ml容量瓶中加氯仿溶解，稀釋至刻度，精密吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml分別至10ml容量瓶中，加氯仿稀釋至刻度。用紫外分光光度計(jì)，以氯仿為空白波長測定吸光度。經(jīng)回歸處理得線性回歸方程為:A=1.1603x-0.0008，(n=6)，r=0.9994？梢娫摲椒ㄔ1.03～6.18μg/ml范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

　　2.3精密度配制不同濃度靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)液，以氯仿為空白，同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，測定結(jié)果并計(jì)算密度。于1日內(nèi)連續(xù)測定5次不同濃度樣品，并計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表1。以上樣品連續(xù)測定5天并計(jì)算日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，試驗(yàn)結(jié)果見表1。使用該方法，日內(nèi)、日間精密度良好。

　　表1靛玉紅的日內(nèi)、日間精密度(略)

　　2.4回收率的考察精密量取樣品適量，加入靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)液，以氯仿為空白，同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，測定結(jié)果并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

　　表2靛玉紅的回收率(略)

　　從以上回收率，日內(nèi)、日間精密度的測定結(jié)果可以看出，采用本法系統(tǒng)穩(wěn)定、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性均良好，且操作簡便，因此適合用于板藍(lán)根滴眼液中靛玉紅的含量測定。

　　2.5樣品的測定

　　2.5.1萃取時(shí)間的選擇同一批樣品精密量取2.5ml至分液漏斗，加入5ml氯仿，振搖并計(jì)時(shí)。當(dāng)振搖10min時(shí)，取出氯仿層溶液適量，以氯仿為空白，于290nm處測定吸光度;倒回分液漏斗繼續(xù)振搖，并分別在20min、30min重復(fù)操作。結(jié)果見表3。

　　表3振搖時(shí)間對(duì)萃取的影響(略)

　　結(jié)果表明，延長振搖時(shí)間并未使萃取量有顯著的增加。因此，每次萃取時(shí)，振搖10min即可。

　　2.5.2萃取量選擇同一批樣品精密量取2.5ml至分液漏斗，加入5ml氯仿，振搖10min后，將氯仿層全部分離出來，以氯仿為空白，在290nm處測定吸光度。重復(fù)上述操作5次，累計(jì)加入25ml氯仿。結(jié)果見表4。

　　表4不同提取次數(shù)對(duì)測定的影響(略)

　　將所測A值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，所得濃度即為第n次萃取后，萃取液氯仿中的相當(dāng)于靛玉紅的濃度。將濃度累計(jì)，即得n次萃取后，氯仿中相當(dāng)于靛玉紅的濃度，也就是樣品相當(dāng)于靛玉紅的濃度。計(jì)算結(jié)果見表5。

　　表5不同提取容積對(duì)測定的影響(略)

　　從試驗(yàn)結(jié)果和計(jì)算結(jié)果表明，第四、五次萃取后濃度已無明顯變化，因此，萃取2.5ml樣品，用20ml氯仿即可。

　　2.5.3萃取次數(shù)的選擇精密量取2.5ml樣品3份，分別20ml氯仿以不同次數(shù)對(duì)其進(jìn)行萃取:第一組20ml萃取1次;第二組先后以10ml萃取2次;第三組先以5ml、5ml，10ml萃取3次;第四組分別以5ml萃取4次。分別測定吸光度并計(jì)算濃度，操作步驟與計(jì)算方法同上。結(jié)果見表6。

　　表6不同萃取次數(shù)對(duì)測定的影響(略)

　　由于萃取3次與萃取4次濃度變化不大，且4次萃取時(shí)的4次溶液開始乳化，因此，只需將20ml氯仿分3次萃取即可。

　　2.5.4重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)同一組樣品測定5次，操作同上。結(jié)果見表7。

　　表7重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)

　　從結(jié)果可知，該萃取方法重現(xiàn)性較好，操作簡便易行。

　　2.5.5含量測定方法:精密吸取板藍(lán)根滴眼液2.5ml于分液漏斗中，再精密吸取5ml氯仿加入其中，振搖10min，分離氯仿層，以氯仿為空白，再290nm處測定吸光度;再依次精密吸取5ml、10ml氯仿萃取2次，操作同上。將吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程進(jìn)行計(jì)算，方法同上。

　　測定五批樣品，計(jì)算結(jié)果見表8。

　　表8不同批號(hào)的含量測定結(jié)果(略)

　　該含量測定方法重現(xiàn)性較好，且操作簡單易行;通過對(duì)五批樣品的測定，可確定該板藍(lán)根滴眼液的含量相當(dāng)于靛玉紅濃度的0.720～0.750μg/ml。

　　3討論

　　本文通過對(duì)板藍(lán)根提取液的紫外掃描，確認(rèn)了板藍(lán)根的有效成分為靛玉紅，并建立了以靛玉紅為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的紫外分光光度法作為板藍(lán)根滴眼液的含量測定方法。通過回收率試驗(yàn)以及日內(nèi)差、日間差試驗(yàn)，證明該方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，且簡便易行。