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親和色譜的載體選擇

[2012/11/5]

　　用于親和色譜的理想載體應(yīng)具有下列特性：⑴不溶性：不溶于水;⑵滲透性：疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，容許大分子自由通過;⑶有一定硬度，最好為均一的珠狀;⑷具有大量可供反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，能與大量配基共價連接;⑸非特異性吸附能力極低;⑹能抗微生物和酶的侵蝕;⑺有較好的化學(xué)穩(wěn)定性;⑻親水性。選擇配基根據(jù)對純化大分子的特異性的全面認(rèn)識。

　　選擇也的配基有兩條標(biāo)準(zhǔn)：第一是蛋白質(zhì)和配基之間必須有強(qiáng)的親和力，解離常數(shù)在5mM以上不是好配基;相反親和力太高也是有害的，因?yàn)樵诮怆x蛋白質(zhì)──配基復(fù)合物時所需的條件就要強(qiáng)烈，這樣可能使蛋白質(zhì)變性。例如用抗生物素蛋白作配基純化含生物素的羧化酶時，生物素──抗生物素蛋白復(fù)合物的解離常數(shù)達(dá)10-15M，解離時需要pH1.5，6M鹽酸胍，在這種條件中。羧化酶大多數(shù)已經(jīng)變性。選擇配基的第二個標(biāo)準(zhǔn)是，配基必須具有適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團(tuán)，這種基團(tuán)不參與配基與蛋白質(zhì)之間特異結(jié)合，但可用于活化和載體相連接，同時又不影響配基與蛋白質(zhì)之間的親和力。

　　瓊脂糖凝膠親水性強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定(商品名：Sepharose);聚丙烯酰胺凝膠理化性質(zhì)穩(wěn)定，耐有機(jī)溶劑及去污劑，抗微生物能力強(qiáng)，特別適應(yīng)用配基與提取物親和力比較弱的物質(zhì)。葡聚糖凝膠：有良好的化學(xué)及物理性質(zhì)，孔經(jīng)小。纖維素非特易吸附嚴(yán)重，廉價，易得。