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氣相色譜法檢測BHA、BHT、TBHQ的疑難詳解

[2012/11/26]

　　BHA(丁基羥基茴香醚)，BHT(2,6-二叔羥基對(duì)甲酚)，TBHQ(特丁基對(duì)苯二酚)是常用的加于植物油中的酚類抗氧化劑。

　　GB/T5009.30-2003介紹了BHA、BHT的檢測方法，但這個(gè)方法真的用起來卻使人一頭霧水，不僅步驟復(fù)雜，而且效果很差，漏洞很多，堪稱最“使人困惑不解”的國標(biāo)方法。

　　該方法用石油醚溶解油樣，過硅膠-弗羅里矽土(6 4)層析柱，再用100ml二氯甲烷分五次淋洗，減壓揮干，用二硫化碳定容后開機(jī)進(jìn)樣。儀器分析方面無懈可擊，問題出在樣品前處理上。

　　首先層析柱如何裝填就是一個(gè)問題。按照方法，需使用者自行裝填層析柱，而手工裝填的層析柱松緊不一，很難控制質(zhì)量。填的松了怕吸附不夠，填的緊了淋洗速度奇慢，1小時(shí)也滴不出幾滴，一個(gè)樣品可能要淋洗幾天。

　　洗脫時(shí)問題也有一個(gè)大漏洞，按照方法操作，無論如何小心都會(huì)洗出一部油分，這些油分可怎么揮干呢。難道用二硫化碳只是為了連油帶抗氧化劑一起溶解后進(jìn)樣嗎?如果油分進(jìn)了柱子，可能進(jìn)不了幾個(gè)樣就污染到無法繼續(xù)的地步。而且二硫化碳揮發(fā)性極強(qiáng)，用它定容本身就不可靠。

　　如果按GB/T5009.30-1996，幾乎不可能做成實(shí)驗(yàn)，且工作量大，接觸毒物多，然而既得不到準(zhǔn)確的結(jié)果，色譜柱也會(huì)很快報(bào)廢。

　　其實(shí)，植物油中的抗氧化劑檢測可以相當(dāng)簡單，甚至可以作為色譜初學(xué)者的入門功課。前處理方法是：稱取1至2克油樣，用10ml甲醇分三次萃取液(三次比例為4，3，3ml)，合并萃取液上機(jī)。就這么點(diǎn)步驟，而且實(shí)際效果很好，氣相液相都可以做，同時(shí)還可用于處理TBHQ，回收率一般都在90%以上。

　　因此，筆者實(shí)在不理解為什么有人放著簡單的方法不用，而偏要用如此“使人困惑不解”的方法。

　　關(guān)于國標(biāo)處理方法就討論到這里，下面只討論用甲醇萃取的方法。

　　由于油樣的組成相當(dāng)復(fù)雜，與常用的有機(jī)試劑多少有一些混溶。甲醇提取液中也會(huì)有一小部分的油分，不信的話可以加一些水，純甲醇溶液無變化，而油樣的甲醇提取液一加水立刻混濁。

　　這一小部分的油分對(duì)于檢測沒有什么太大影響，但對(duì)于色譜柱污染較大。因此在不影響回收率的前題下如何排除油分的影響是該實(shí)驗(yàn)的一個(gè)重點(diǎn)。

　　試過用各種吸附劑、層析填料，其效果都不如一張普通的濾紙。因?yàn)闉V紙能吸收油分。最好先把甲醇提取液放于冰箱冷凍層冰凍幾小時(shí)，再趁涼過濾。這是筆者目前發(fā)現(xiàn)的最好的驅(qū)油方法。

　　BHA、BHT需配合使用才會(huì)有較好的抗氧化效果，因此有BHA就會(huì)有BHT，而TBHQ一般是單獨(dú)使用。這一點(diǎn)對(duì)我們非常有用，無論在氣相色譜還是液相色譜，BHA、BHT的分離都相當(dāng)好，但是TBHQ與BHT的峰形可能會(huì)有一部分重疊，很難完全分開;因此我們可以將BHA、BHT配為一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，TBHQ單獨(dú)作一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，分別進(jìn)樣，分別定量。

　　當(dāng)使用氣相色譜時(shí)，如用填充柱，填料為10%SE-30或10%QF-1，如使用毛細(xì)管柱，可選用10m以上，0.53mm的非極性柱。

　　當(dāng)使用液相色譜儀時(shí)，流動(dòng)相為92:8的甲醇水溶液，紫外檢測器，檢測波長280nm，當(dāng)降低甲醇含量時(shí)，出峰時(shí)間會(huì)延遲，BHT尤其顯著。

　　為什么要用三次萃取呢。如果只針對(duì)BHA、TBHQ，一次萃取就夠了，而BHT在甲醇中的溶解性稍弱，因此用三次萃取增大回收率。

　　如果對(duì)人身防護(hù)很看重，可以用乙醇代替甲醇，但它與油分的互溶程度更大些，提取液似乎沒有那么“干凈”。當(dāng)處理某些輕質(zhì)油如代可可脂時(shí)，會(huì)有完全混溶現(xiàn)象，這時(shí)只能用甲醇。

　　如果要檢測糕點(diǎn)類食品中的BHA、BHT、TBHQ，舊國標(biāo)中有用乙醚提取出油脂，再對(duì)油脂進(jìn)行檢測的方法。這樣做費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且提取回收率不高？梢灾苯佑眉状紝(duì)食品進(jìn)行提取，提取液直接進(jìn)樣。

　　如果要得到比較準(zhǔn)確的結(jié)果，應(yīng)在冰箱的冷凍層存有固體的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。因?yàn)锽HA、BHT、TBHQ的標(biāo)準(zhǔn)溶液雖然在一般情況下較穩(wěn)定，但有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)爆發(fā)式的衰減,就是高濃度的貯備液也難以幸免，尤其是TBHQ。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的準(zhǔn)確是實(shí)驗(yàn)的根本所在，因此我們要提防這一情況，如果標(biāo)準(zhǔn)峰面積較前一段實(shí)驗(yàn)的峰面積明顯減小，則應(yīng)引起重視。如有條件，可用紫外光度計(jì)掃描標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次記錄吸收值。

　　為實(shí)驗(yàn)方便計(jì)，BHA、BHT、TBHQ的標(biāo)準(zhǔn)溶液可以按以下方法配制。先各稱取0.025克固體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別溶于25ml容量瓶中(溶劑：甲醇)，得濃度為1.00g/L的貯備液，再各吸取1.0ml于50.0ml容量瓶中，定容，得濃度為0.02g/L的使用液。BHA、BHT的使用液可以也最好配在一起，TBHQ單列。這個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)峰與實(shí)際的樣品峰面積接近，適于做單點(diǎn)定量法。