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生物實驗中試劑的作用及實驗方法總結

[2012/12/14]

　　一、化學物質的檢測方法

　　①淀粉——碘液 (藍色)

　、谶原性糖——斐林試劑\班氏試劑(磚紅色)

　　③CO2——Ca(OH)2溶液(澄清石灰水變渾濁)

　、苋樗帷猵H試紙

　　⑤O2——余燼復然

　、薜鞍踪|——被蛋白酶水解 、雙縮脲試劑(紫紅色)

　、咧尽K丹Ⅲ染液 (橘黃色)、蘇丹Ⅳ染液 (紅色)

　、郉NA——二苯胺(藍色)

　、崛旧w——龍膽紫溶液，醋酸洋紅溶液

　　二、實驗條件的控制方法

　　1、加水中氧氣——泵入空氣或吹氣或放入綠色植物

　　2、減少水中氧氣——容器密封或油膜覆蓋或用涼開水

　　3、除去容器中CO2——NaOH溶液

　　4、除去葉中原有淀粉——置于黑暗環(huán)境

　　5、除去葉中葉綠素——酒精水浴加熱

　　6、除去光合對呼吸干擾——給植株遮光

　　7、如何得到單色光——棱鏡色散或透明薄膜濾光

　　8、血液抗疑——加入檸檬酸鈉

　　9、線粒體提取——細胞勻漿離心

　　10、骨無機鹽的除去——鹽酸溶液

　　11、滅菌方法——培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌;接種環(huán)用火焰灼燒滅菌;雙手用肥皂冼凈，擦干后用75%酒精消毒;實驗室或接種箱用甲醛蒸汽或紫外燈滅菌;整個過程都在實驗室無菌區(qū)或酒精燈旁進行。

　　三、實驗結果的顯示方法

　、俟夂纤俣取狾2釋放量或CO2吸收量或有機物生成量

　　◆水生植物可依氣泡的產生量或產生速率;

　　◆離體葉片若事先沉入水底可依單位時間內上浮的葉片數目;

　　◆植物體上的葉片可依指示劑(如碘液)處理后葉片顏色深淺。

　、诤粑俣取狾2吸收量或CO2釋放量或有機物消耗量

　　③原子或分子轉移途徑——放射性同位素示蹤

　　④細胞液濃度大小——質壁分離

　、葜参锛毎欠袼劳觥|壁分離

　、藜谞钕偌に亍獎游锖难趿，發(fā)育速度等

　、呱L激素—生長速度(體重、體長變化)

　　⑧胰島素作用—動物活動狀態(tài)

　、峋俊鋽，亞甲基藍褪色程度

　　四、實驗中控制溫度的方法

　　1、還原糖，DNA鑒定——沸水浴加熱

　　2、酶促反應——水浴保溫

　　3、用酒精溶解葉中的葉綠素——酒精要隔水加熱、

　　4、細胞和組織培養(yǎng)以及微生物培養(yǎng)——恒溫箱培養(yǎng)

　　五、實驗中常用器材和藥品的使用

　　1、NaOH：用于吸收CO2或改變溶液的pH

　　2、Ca(OH)2：鑒定CO2

　　3、CaCl2提高細菌細胞壁的通透性

　　4、HCl：解離或改變溶液的pH

　　5、NaHCO3：提供CO2

　　6、NaCl：配制生理鹽水或用于提取DNA

　　7、瓊脂：激素或其他物質的載體或培養(yǎng)基的凝固劑

　　8、亞甲基藍：用于檢測污水的細菌含量

　　9、酒精：用于消毒、提純DNA、葉片脫色及配制解離液

　　10、蔗糖：測定植物細胞液濃度或觀察質壁分離和復原、作為碳源和能源物質

　　11、濾紙：過濾或紙層析

　　12、紗布、尼龍布：過濾，遮光

　　13、龍膽紫溶液或醋酸洋紅：堿性染料，用于染色體染色

　　14、檸檬酸鈉——血液抗凝劑

　　六、一些常見的實驗方法

　　⑴、根據顏色來確定某種物質的存在：

　　淀粉 I2(藍色);還原性糖 斐林試劑(磚紅色);脂肪 蘇丹Ⅲ(橘黃)或 蘇丹Ⅳ(紅色);蛋白質 雙縮脲試劑(紫色);

　　大腸桿菌 伊紅和美藍(菌落為深紫色，有金屬光澤)

　、、用顏色標記法來確定原腸胚三個胚層的分化情況。

　　⑶、用熒光標記法來證明細胞膜具有一定的流動性

　　⑷、同位素示蹤法：光合作用產生氧氣的來源; 光合作用中二氧化碳的去向; 噬菌體侵染細菌實驗證明DNA是遺傳物質，蛋白質不是遺傳物質; DNA的復制是半保留復制。

　、、確定某種元素為植物生長必需的元素的方法: 水培法(完全培養(yǎng)液與缺素完全培養(yǎng)液對照)

　、省@得無籽果實的方法: 用適宜濃度的生長素處理花蕾期已去雄的子房，如無籽蕃茄、 誘導染色體變異，如無籽西瓜。

　、、確定某種激素功能的方法： 飼喂法，切除注射法，閹割移植法，切除口服法。

　　⑻、確定傳入、傳出神經的功能： 刺激 觀察效應器的反應或測定神經上的電位變化。

　、汀⒅参镫s交的方法 雌雄同花：花蕾期去雄 套袋 開花期人工授粉 套袋 雌雄異花：花蕾期雌花套袋 開花期人工授粉 套袋

　　⑽、確定某一顯性個體基因型的方法： 測交; 該顯性個體自交。

　、、確定某一性狀為顯性性狀或隱性性狀的方法： 具有一對相對性狀的純合體的雜交 自交，觀察后代是否有性狀分離。

　、、確定某一個體是否具有抗性基因的方法： 確定小麥是否具有抗銹病基因，用銹病菌去侵染，一段時間后，觀察有無銹斑出現(xiàn)。

　、、鑒定血型的方法： 用標準血清與待測血型混合，在顯微鏡下觀察血液的凝集情況。

　、、育種的方法： 雜交育種;人工誘變育種;單倍體育種;基因工程育種;細胞工程育種;多倍體育種等。

　、、測定種群密度的方法：樣方法; 標志重捕法

　、、生態(tài)瓶的制作方法;瓶必須透明，且封閉

　　⒄、分離微生物的方法： 平板劃線法;用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)(如：圓褐固氮菌的分離，金黃色葡萄球菌的分離，細菌和酵母菌的分離)

　、帧y定微生物群體生長的方法：

　　測定細菌的數目---顯微計數

　　測定細菌的重量---取一定體積的培養(yǎng)基，經離心分離，反復洗滌后，稱濕重，或烘干后稱干重。

　　七、實驗研究方法

　　1、顯微觀察法 如觀察植物細胞有絲分裂的實驗，觀察植物細胞質壁分離和復原的實驗。

　　2、觀察法 觀察微生物的外在性狀和表現(xiàn)等，如觀察注射了甲狀腺激素的小狗的活動狀況，觀察動物的毛色和植物花色的遺傳實驗等。

　　3、同位素示蹤法 如噬菌體侵染細菌的實驗，用18O和14C追蹤光合作用中氧原子和碳原子轉移途徑的實驗等。

　　4、加法創(chuàng)意 如用飼喂法研究甲狀腺激素的實驗、用注射法研究生長激素的實驗，用移植法研究性激素的實驗等。

　　5、減法創(chuàng)意 如用閹割法、摘除法研究性激素、甲狀腺激素、生長激素的實驗，雌蕊授粉后除去發(fā)育著的種子實驗等。

　　6、雜交實驗法 如孟德爾發(fā)現(xiàn)遺傳定律的植物雜交、測交的實驗，小麥的雜交實驗等。

　　7、化學分析法 如番茄和水稻對Ca 和Si選擇吸收的實驗，葉綠體中色素的提取和分離實驗等。

　　8、理論分析法 如大小草履蟲競爭的實驗，植物根向地生長、莖背地生長的實驗，植物向光性的實驗等。

　　9、模擬實驗法 如滲透作用的實驗裝置，分離定律的模擬實驗等。

　　八、實驗技術

　　1、光學顯微鏡的使用

　　適用于觀察生物的微觀結構，如細胞的結構，包括光鏡下可看到的各種細胞器。

　　2、臨時裝片、切片和涂片的制作技術

　　適用于顯微觀察，凡需在顯微鏡下觀察的生物材料，必須先制成臨時裝片、切片或涂片。如“觀察植物細胞的質壁分離和復原的實驗”中要制作洋蔥表皮的臨時裝片，在生物組織中脂肪的鑒定中要制作花生種子的切片等。

　　3、研磨和過濾技術

　　適用于從生物組織中提取物質，如酶、色素等。研磨時要先將生物材料切碎，然后加入研磨劑〈常用SiO2〉、提取液及其他必要物質，充分研磨后，往往要進行過濾，以除去濾渣，所用過濾器具則根據需要或或根據試題中提供的器材加以選用，如可用濾紙、紗布、脫脂棉、尼龍布等。

　　4、解離技術

　　用于破壞細胞壁，分散植物細胞，制作臨時裝片。

　　5、恒溫技術

　　適用于有酶參加的生化反應，一般用水浴或恒溫箱。根據題目要求選用。

　　6、紙層析技術

　　適用于溶液中物質分離。重要步驟包括制備濾紙條、畫濾液細線、層析分離。

　　7、根尖培養(yǎng)技術 觀察植物根尖有絲分裂的實驗

　　8、溶液培養(yǎng)法 探究植物必需的礦質元素的實驗，〈拓展——微生物生長因子的判斷的實驗〉;植物的無土栽培〈注意溶液濃度和溶解氧〉。