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膠原蛋白提取與檢測(cè)方法

[2017/6/12]

前言：膠原蛋白是一種天然高分子化合物，具有一定的凝膠強(qiáng)度，乳化性、低黏度性、生物相容性、吸水和保濕性等，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥保健品、化妝品等行業(yè)中。膠原蛋白主要存在于動(dòng)物皮、骨、軟骨、牙齒、肌腱、韌和血管中。

原料檢測(cè)及膠原蛋白提取方法：

1、原料成分基礎(chǔ)檢測(cè)   水分測(cè)定--直接干燥法  灰分測(cè)定--550℃灰分法  粗蛋白檢測(cè)--凱氏定氮法  脂肪測(cè)定--索氏抽提法

2、魚尾預(yù)處理，去除殘肉、硬骨、脂肪，等誰清洗，有機(jī)溶劑去除脂溶性色素，脫鈣、除蛋白后，冷凍備用。

3、膠原蛋白提取   4℃下膠原蛋白提取最佳工藝為鹽酸胍濃度3mol/l、胃蛋白酶添加量3.0%、提取時(shí)間72h、料液比1:50（g/ml）、提取次數(shù)2次。純化：在以上粗膠原蛋白中加入NaCI至溶液濃度終濃度為3.0mol/l，同時(shí)析出絮狀沉淀，4℃，4000r/min離心15min，重復(fù)兩次，透析，冷凍干燥，即得。

膠原蛋白含量檢測(cè)方法：

1、紫外可見分光光度法

   往封蓋的試管中加入樣品4-6mg，加入6mol/l鹽酸溶液5ml，在110℃分解24h后，蒸餾水定容到25ml，在40℃下用旋蒸除去水和鹽酸，添加30ml蒸餾水溶解，吸取0.5ml測(cè)定吸光度，按表曲算出濃度。

2、聚丙烯酰胺電泳法

采用垂直板電泳，先配置2.5mg/ml的膠原蛋白溶液，與樣品處理液混合，在沸水中加熱4min，冷卻備用，用7.5%丙烯酰胺對(duì)膠原蛋白進(jìn)行電泳分析，采用考馬斯亮藍(lán)R250染色，體積分?jǐn)?shù)為10%醋酸和30%甲醇脫色。

3、液相色譜法

      鯽魚組織鹽酸110℃水解18h，Dns-Ci衍生，然后以甲醇和四氫呋喃-甲醇-0.05mol/l乙酸鈉溶液為流動(dòng)相，在反相C18柱上進(jìn)行分離。在20-400μg/ml范圍內(nèi)關(guān)系良好。